PCR - Polymerasekettenreaktion

Abstract

Mittels PCR können geringe Mengen von DNA für weitere Untersuchungen vervielfältigt werden. Mithilfe der Taq-Polymerase werden DNA-Abschnitte vergleichbar mit der DNA-Replikation synthetisiert.

Allgemeines

Vervielfältigung der DNA
Für PCR erforderlichen Reaktionen werden unterschiedliche Temperaturen benötigt
- PCR wird in Thermocycler durchgeführt. Hier können Temperaturen schnell angepasst werden
entspricht im Wesentlichen DNA-Replikation

Ablauf

Denaturierung der DNA

DNA wird in Einzelsträngen benötigt
bei ca. $90 ° C$ lösen sich die Wasserstoffbrücken zwischen den Nukleotiden der DNA

Anlagerung der Primer

es werden wie bei Replikation Primer benötigt, damit die DNA-Polymerase ansetzen kann
die Primer werden zu den DNA-Einzelsträngen dazugegeben
Die Primer binden bei $50 bis 65 ° C$ an der DNA-Einzelsträngen am 3'Ende komplementär zu den dortigen Basenpaaren

Synthese der DNA-Doppelstränge

für PCR wird Taq-Polymerase verwendet
- besonders hitzestabil
bei $70 ° C$ beginnt Elongation der Replikation. Es gibt aber nur den Leitstrang
Nachdem die Taq-Polymerase am 5'-Ende angekommen ist, ist die DNA vollständig verdoppelt
Nun wird die Temperatur wieder auf $90 ° C$ erhöht
- Die Stränge trennen sich wieder
Jetzt kann der nächste PCR-Zyklus beginnen
nach 20 Zyklen entstehen 2^20 = 1.048.576 DNA Kopien des DNA-Abschnitts
![[Natura 8.4 PCR - Replikation im Reagenzglas.pdf]]

Aufgaben

2.

![[Natura PCR - Aufgabe 2.pdf]]